cytometriprotokoll

Flödescytometri (FACS) färgningsprotokoll (Cellytafärgning)

• Skörda, tvätta cellerna (enkelcellsuspension) och justera cellantalet till en koncentration av 1-5x106 celler / ml i iskall FACS-buffert (PBS, 0,5-1% BSA eller 5-10% FBS, 0,1% NaN3 natriumazid * ). ...
• Tillsätt 100 pl cellsuspension till varje rör.

1. Vad används flödescytometri för?
2. Vad är principen för flödescytometri?
3. Vad kan flödescytometri mäta?
4. Hur fläckar du celler för flödescytometri??
5. Kan flödescytometri upptäcka döda celler?
6. Kan flödescytometri upptäcka leukemi?
7. Varför används laserljus i flödescytometri?
8. Hur används flödescytometri i hematologi?
9. Hur representerar du flödescytometrodata?
10. Kan flödescytometri detektera lymfom?
11. Hur lång tid tar flödescytometrisk resultat?
12. Hur kompenserar du flödescytometri?

Vad används flödescytometri för?

Flödescytometri är en laboratoriemetod som används för att detektera, identifiera och räkna specifika celler. Denna metod kan också identifiera vissa komponenter i celler. Denna information baseras på fysiska egenskaper och / eller markörer som kallas antigener på cellytan eller i celler som är unika för den celltypen..

Vad är principen för flödescytometri?

Den grundläggande principen för flödescytometri är passage av celler i en enda fil framför en laser så att de kan detekteras, räknas och sorteras. Cellkomponenter märks fluorescerande och exciteras sedan av lasern för att avge ljus vid varierande våglängder.

Vad kan flödescytometri mäta?

Cytometri, i sin renaste form, är mätningen av cellegenskaper, som kan inkludera cellstorlek, cellantal, cellcykel och mer. Denna teknik gör det möjligt för forskare att få mycket specifik information om enskilda celler.

Hur fläckar du celler för flödescytometri??

Späd lämpligt fluorokrommärkt sekundärt reagens i 100 µL flödescytometri-färgningsbuffert och tillsätt till cellerna. Inkubera i minst 30 minuter vid 2-8 ° C eller på is. Skydda mot ljus. Tvätta cellerna genom att tillsätta Flow Cytometry Staining Buffer.

Kan flödescytometri upptäcka döda celler?

Förlust av membranintegritet är en definitiv indikator på celldöd i flödescytometriska analyser. Celler som utesluter ett dött cellfärgämne anses vara livskraftigt, medan celler med ett komprometterat membran tillåter färgämnet inuti cellen att fläcka en inre komponent, vilket identifierar cellen som död.

Kan flödescytometri upptäcka leukemi?

Flödescytometriimmunfenotypning kan utföras på blod, benmärg eller andra prover för att ge denna ytterligare information. Det kan upptäcka normala celler såväl som onormala celler vars mönster av markörer vanligtvis ses med specifika typer av leukemi och lymfom.

Varför används laserljus i flödescytometri?

Lasrar används i flödescytometri som excitationskälla för fluoroformärkta cellprover. Ofta behövs flera laserfärger för att karakterisera flera cellulära egenskaper.

Hur används flödescytometri i hematologi?

Flödescytometri har använts för att korrekt identifiera och fenotypa mottagarens röda blodkroppar (44). Flödescytometri används alltmer i blodbanken för att bedöma leukocytförorening i leukocytreducerade blodprodukter (45) (46).

Hur representerar du flödescytometrodata?

Flödescytometrodata representeras vanligtvis på ett av två sätt: histogram, som bara mäter eller jämför en enda parameter, och punktdiagram som jämför 2 eller 3 parametrar samtidigt på en två- eller tredimensionell spridningsdiagram.

Kan flödescytometri detektera lymfom?

Flödescytometri kan diagnostisera klassiskt Hodgkin-lymfom i lymfkörtlar med hög känslighet och specificitet.

Hur lång tid tar flödescytometrisk resultat?

Dessa mönster jämförs med normala mönster för att bestämma betydelsen av resultaten. Testet tar ungefär tre timmar och består av att färga cellerna, skaffa cellerna på en flödescytometer och sedan låta en skicklig teknolog analysera resultaten som har sparats i en datafil.

Hur kompenserar du flödescytometri?

Hur man kompenserar ett 4-färgs flödescytometriexperiment korrekt

1. 4 steg för att kompensera ett 4-färgsexperiment. ...
2. Välj rätt transportör för ersättning. ...
3. Steg 2: Samla in data och se till att det finns tillräckligt många händelser. ...
4. Beräkna kompensationen korrekt. ...
5. Tillämpa kompensationsvärdena och inspektera resultaten.