trypsin edta cellodlingsprotokoll

Procedur

1. Ta bort mediet från odlingskärlet genom aspiration och tvätta monoskiktet med en saltlösning fri från Ca²⁺ och Mg²⁺ för att ta bort alla spår av serum. ...
2. Dispensera tillräckligt med trypsin eller trypsin / EDTA-lösning i odlingskärlen för att helt täcka monolager av celler och placera i 37 ° C inkubator i ~ 2 minuter.

1. Hur förbereder man trypsin EDTA-lösning för cellodling?
2. Varför trypsin EDTA används i cellodling?
3. Hur görs subkultur av vidhäftande celler med användning av trypsin EDTA och EDTA ensam?
4. Hur tinar du trypsin EDTA?
5. Kan trypsin döda celler?
6. Vad kan vi lägga till kulturen för att hämma trypsin?
7. Kan EDTA döda celler?
8. Varför hämmar serum trypsin?
9. Är EDTA giftigt för celler?
10. Varför använder vi trypsin?
11. Varför tvättar du celler med PBS?
12. Varför tvättar du cellerna med PBS innan du tillsätter trypsin?

Hur förbereder du trypsin EDTA-lösning för cellodling?

Tillsätt 12 till 15 ml färska cellodlingsmedier till en ny kolv och balansera detta medium till lämpligt pH och temperatur. Samla cellsuspensionen, räkna och / eller dela den och fördela cellerna i den nyberedda kolven. Se produktbladet för cellinjer för rekommenderade underodlingsförhållanden.

Varför trypsin EDTA används i cellodling?

EDTA fungerar som en metallchelator som läggs till trypsinlösningar för att förbättra aktiviteten. EDTA tillsätts för att avlägsna kalcium och magnesium från cellytan vilket gör att trypsin kan hydrolysera specifika peptidbindningar. Den huvudsakliga anledningen till att använda EDTA tillsammans med trypsin är att ta bort cell till celladhesion.

Hur görs subkultur av vidhäftande celler med användning av trypsin EDTA och EDTA ensam?

Pipettera trypsin / EDTA på det tvättade cellskiktet med cirka 1 ml per 25 cm2 ytarea. Vrid kolven för att täcka monolagret med trypsin. Dekantera överskott av trypsin. Sätt tillbaka kolven i inkubatorn och låt stå i 2-10 minuter.

Hur tinar du trypsin EDTA?

Ta bort trypsin / EDTA-lösningen från förvaring och placera den över natten vid 2 ° C till 8 ° C. 2. Överför flaskan till ett 37 ° C vattenbad och rör om flaskan försiktigt för att blanda eventuella lösta ämnen. Förvara inte trypsin / EDTA-lösning vid 37 ° C längre än nödvändigt.

Kan trypsin döda celler?

Inkubering av celler med för hög trypsinkoncentration under en för lång tidsperiod kommer att skada cellmembran och döda cellerna.

Vad kan vi lägga till kulturen för att hämma trypsin?

Trypsin inhiberas av serum som ger de tvåvärda katjoner som kalcium och magnesium som spelar en roll i både intra- och intercellulär signalprocess, dvs bildande av CAM, så serum tillsätts vanligtvis till behållaren när celler har lossnat - detta kan bekräftas genom observation under en mikroskop.

Kan EDTA döda celler?

a. Använd 5 mM EDTA eller högre OBS: för mycket EDTA kan döda dina celler b. Accutase och Accumax är celldissociationsprodukter som säljs av Innovative Technologies som kan hjälpa till att upprätthålla enstaka cellsuspensioner.

Varför hämmar serum trypsin?

Hej, Trypsin är ett endopeptidas som smälter proteiner. I trypsiniseringsprocessen smälts extracellulära proteiner, vilket leder till att cellerna lossnar från odlingskärlets botten. ... Serum innehåller många proteashämmare som stoppar trypsin, mestadels alfa-1-antitrypsin. Hoppas det här hjälper!

Är EDTA giftigt för celler?

Ingen toxicitet observerades när celler exponerades för 100 mikroM Zn- eller Fe-EDTA, men samma koncentration av Cu-EDTA var lika giftig som Na-EDTA. Kontinuerlig exponering av cellodlingarna för 5 mikroM Na- eller Zn-EDTA i upp till 7 veckor gav inga indikationer på toxicitet.

Varför använder vi trypsin?

Trypsin är ett enzym som hjälper oss att smälta protein. I tunntarmen bryter trypsin ner proteiner och fortsätter matsmältningsprocessen som började i magen. Det kan också kallas ett proteolytiskt enzym eller proteinas. Trypsin produceras av bukspottkörteln i en inaktiv form som kallas trypsinogen.

Varför tvättar du celler med PBS?

I cellodling under spelitting behövs PBS-tvättning för att ta bort serumet från media så att trypsin kommer att kunna lossa cellerna från plattan, annars kan serum inaktivt trypsinet.

Varför tvättar du cellerna med PBS innan du tillsätter trypsin?

Innan du lägger till det i cellerna måste du tvätta bort cellodlingsmediet, eftersom trypsin också skulle bryta ner proteiner som finns i mediet, som FCS, vilket minskar dess aktivitet innan det når cellerna.